产品货号：
KD2163
中文名称：
动物组织细胞RNA提取试剂盒
英文名称：
Animal tissue cell RNA Extraction Kit
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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保存：2～8℃
产品内容：
产品说明：
Biorab动物组织细胞RNA提取试剂盒基于Trizol的方法，适用于常规动物组织细胞样品的总RNA提取。纯化好的总RNA可用于mRNA分离，RT-PCR，Northern杂交等下游分子实验。
不适用于骨骼以及软骨等特殊样品的RNA提取，此类样品建议使用骨组织RNA提取试剂盒(Cat：KD2161)。
自备试剂：
氯仿
(一)样品处理：
1.贴壁细胞：吸尽培养液，在每10cm2细胞中加入1mL的裂解液。用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解并且让基因组DNA充分断裂。
2.培养细胞：每1～5×106细胞沉淀，加入1mL的裂解液。用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解并且让基因组DNA充分断裂。
3.新鲜组织：每50～100mg的组织样品液氮研磨成粉后加入1mL的裂解液，或者直接加入1mL的裂解液用匀浆器充分研磨。震荡30 s。
(二)样品纯化：
1.将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备氯仿(1mL裂解液需0.2mL氯仿)，振荡器上充分振荡混匀30 s。
2.12000rpm室温离心3min，吸取上清到新的离心管中，建议取900μL上清。
3.在上清中加入900μL的RNA结合液，颠倒混匀，分多次加入同一个RNA纯化柱中(如有絮状物或沉淀产生，一并加入纯化柱中)。12000rpm离心1min，弃穿透液。
4.在纯化柱中加入0.5mL RNA洗涤液，室温12000rpm离心30 s，弃穿透液；重复洗涤一次。
(三)RNA收集：
1.将结合有RNA的纯化柱12000rpm离心1min，甩干乙醇。
2.弃收集管，将柱芯转移到1.5mL的RNase-free离心管中，加入30～50μL RNA溶解液，室温放置1min，12000rpm离心1min洗脱RNA。得到的RNA可直接用于后续实验或者-80℃存放。
3.如果要提高RNA产量，加入30-50uLRNA溶解液重复洗脱一次，合并两次穿透液；如果要提高RNA浓度，使用第一次的洗脱液加回到纯化柱中重复洗脱。
注意：建议RNA用于下游实验之前，先进行质量检测。经变性琼脂糖凝胶电泳后，会有清晰的28S和18S条带，以及中间弥散的mRNA条带，其中28S条带是18S条带亮度的1.5～2倍。有时还包括跑在最前面的较暗的5S条带。A260/A280比值1.8~2.0对应RNA纯度90～100%之间。
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